洁特 BIOFIL PAG000001/PAG000005重组蛋白A/G预装柱/填料详细介绍

技术指标：每毫升rProtein A/G结合35~50mg人血清IgG，38-51mg兔IgG /ml填料，5.5-18.5mg鼠血清IgG/ml填料，4.5-17.8mg鼠腹水IgG/ml填料

u 产品简介

通过基因重组技术，将蛋白A与蛋白G基因重组于同一质粒载体中，并在大肠杆菌中进行表达，得到分子量为50.5KDa的可溶性蛋白A/G。该可溶性蛋白A/G具有四个IgG结合位点，来自于蛋白A；和两个IgG的结合位点，来自于蛋白G。因具有上述特性，使得基因工程重组蛋白A/G具有广泛的IgG的结合能力，对各种哺乳类动物的IgG都能结合，使得该产品在IgG的诊断和纯化中具有十分广泛的用途。

本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术，将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化，使得单位体积中结合更多蛋白A/G，产品最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化，或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。

u 产品技术指标

    rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值：4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF

    rec-Protein AG分子量：50.5 KDa

 每分子rec-Protein G可结合IgG位点数：6个（4个来自于蛋白A，2个来自于蛋白G）

    rec-Protein A可结合白蛋白位点数：无

    线性流速：300-500 cm/h

耐压指数：≤0.3 MPa（填料）

u 注意事项

请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时，将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温，恢复至室温使用。

u 产品保存

产品储存于2-8℃，保质期两年。

u rProtein A/G-Sepharose 4FF纯化IgG抗体步骤

以下方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体，不同来源的IgG与rProteinA/ G的结合能力不同，具体情况请参考表1。

1. 将血清或腹水样品（推荐上样量2 mL样品/mL柱）装入截留分子量3.5 KDa透析带中，于4 ℃冰箱中对1× PBS（pH 7.4）透析过夜；

2. 将rProtein A/G-Sepharose 4FF装柱固定好，用10倍柱体积1× PBS（pH 7.4）平衡层析柱，建议流速为1 mL/min；

3. 将透析好的样品从层析柱上端加入，建议流速为1 mL/min，为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样，重复2遍（或者是将样品1次性加入层析柱后置于摇床上，轻轻摇动，结合30 min）；

4. 样品结合后，用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱，建议流速为1 mL/min，勿让层析柱滴干；

5. 洗脱IgG，向层析柱上端加入洗脱液（100 mM甘氨酸，pH 2.7），用预先加有100 μL中和缓冲液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱体积，进行10 % SDS-PAGE电泳，确定IgG样品所在管，回收样品。

6. 加入5倍柱体积再生缓冲液（100 mM甘氨酸，pH 2.0），再加入10倍柱体积ddH₂O清洗层析柱。 向层析柱加入10倍柱体积,20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱。

 表1 rProtein A/G 与Ig结合能力情况

表2 rProtein A/G预装柱系列产品参数